viernes, 23 de abril de 2010

Tarea 2


Exactitud


Material de Referencia: SRM 1508 a


Previsto para validar métodos usados para la determinación de benzoylecgonina (metabolito de la cocaína) en orina humana. Consiste en 4 botes de orina seca congelada, en cada bote se suministras 10 ml de agua libre de materia orgánica.
Concentraciones certificadas:

Concentration------------------Concentration
-----level---------------------------(ng/ml)

Low ____(1508-a1) ------------ 75,3 +- 3,1
Medium_(1508-a2)------------- 158,8 +- 6,4
High ____(1508-a3)------------303 +- 15
Blank ___(1508-a0)--------------no detected


Evaluadas por NIST (National Institute of Standards and Technology) por dos métodos independientes.
Se calcula de acuerdo con : Expression of Uncertainty in Measurement .


Preparación


SRM 1508a Benzoylecgonina fue preparada por Ciba Corning Diagnostics, Irvine, CA. La orina usada para preparar este material fue tomada de donantes voluntarios para el test, y se encontraron resultados negativos para cocaína y sus metabolitos. El procesado para este SRM fue llevado a cabo bajo condiciones limpias. El volumen de orina fue procesado como un lote. Dicho lote se filtra a través de un filtro de acetato de celulosa. El lote se divide en 4 niveles de concentración separados, a los que se le añade las cantidades apropiadas de benzoylecgonina (obtenida por Sigma Diagnostics, ST. Louis, MO. Se homogeneiza. Todos los niveles se disponen en viales de 10 ml y se les practica la congelación seca.


Métodos de Análisis


Benzoylecgonina se determina por: GC/MS, LC/MS.

GC/MS (cromatografía gas/espectrómetro de masas)

Se preparan 2 botes de cada uno de lo 3 sets para cada nivel del SRM. De cada bote se toma una alícuota. Se ajusta el pH de la alícuota y el material pasa a través de una fase sólida (cartucho de intercambio iónico) de acuerdo con los manuales directores de la benzoylecgonina en orina. El solvente se evapora y el residuo se disuelve en N,O-bis(trimethylsilyl)acetamide. Este solvente reacciona con benzoylecgonina formando el éster derivado TMS.
Las medidas se interpretan usando un campo magnético en el espectrómetro de masas. Las concentraciones del analito se calcula por una interpolación lineal de una curva de calibrado construida independientemente para cada set de muestra.

LC/MS (cromatografía líquida/espectrómetro de masas)


Se preparan 2 botes de cada, tal como se explicó arriba. Las muestras se limpian haciéndolas pasar a través de un cartucho de fase sólida diferente al anterior. Después de la evaporación del solvente, el residuo es disuelto en una fase móvil usada para la LC/MS.
Se usa un electro spray con una fuente de ionización y un analizador de masas cuádruple. La LC separación se lleva a cabo usando una columna comercial C-18 con una fase móvil isocrática a un flujo de 0,3 ml/min. La ionización electro spray en el modo positivo es usada con iones seleccionados monitorizadamente.
Las concentraciones del analito se calcula por una interpolación lineal de una curva de calibrado construida independientemente para cada set de muestra.
Las correcciones apropiadas en el valor certificado son hechas basándose en la pureza del componente de referencia de benzoylecgonina usada para la calibración en cada método.

http://ts.nist.gov/MeasurementServices/ReferenceMaterials/archived_certificates/1508a.%20Dec%2022,%202003.pdf


Precisión

- Metabolito en orina: Benzoylecgonina
- Material de referencia estándar: SRM 1508 a
- Concentración (ng/ml): 75,1 +- 3,1----------> Desviación estámdar
- Replicas método a evaluar: n=5
85,3; 83,3; 80,3; 75,3; 70,3

- Detectar errores groseros: Test Q


Qexp = [Xd – Xd1]/R = [70,3 - 75,3]/85,3 - 70,3 = 5/15 = 1/3 = 0,333


Nivel de significación 5%
Qtab = 0,710
Qesp < Qtab ------> Aceptamos H0 : Xd pertenece a P
No hay errores groseros.

X (media)= 78,9
S"( es la desviación al cuadrado)
S" = [(85,3 - 78,9)" + (83,3 - 78,9)" + (80,3 - 78,9)" + (75,3 - 78,9)" +
(70,3 - 78,9)"]/4
S" = 37,3

- Comparación de precisiones: Test F

Fexp = S"exp/S"ref = 37,3/3,1" = 3,88 Ftab = 2,57
(Por la falta del número de muestras utilizadas en el
material de referencia tomamos n = infinito)
Grados de libertad: {nexp-1; nref-1}
Fexp > Ftab ------> S"exp - diferente - S"ref

El método a evaluar no es preciso.